Производственная линия получения вакцин на основе инактивированного антигенасостоящая из: оборудования и компонентов для приготовления сред, систем фильтрации и очистки, емкостей для хранения.

• Среды для культивирования

Для наработки активного вируса используются различные клеточные культуры, на которых этот вирус может реплицироваться. Культивирование может проводиться в формате суспензионной или прикрепленной культуры. Большинство культур клеток выращиваются с заменой питательной среды, как в непрерывном, так и в периодическом режимах. По завершении стадии роста клеток, ростовая среда заменяется на среду для культивирования вируса. Предпочтительными для культивирования являются бессывороточные среды, ввиду низкого риска посторонней вирусной контаминации процесса. В зависимости от используемых культур и режимов культивирования, подбирают соответствующую среду культивирования и необходимые добавки. Например, для культуры клеток насекомых, HEK293 или BHK используют сухие среды культивирования Cellvento BHK-200 EX-CELL^® 293 EX-CELL® 420 подготавливаемые перед процессом, либо жидкие их аналоги, поставляемые готовыми к использованию.

• Биореакторы Mobius® (линейка биореакторов объемом от 3 до 2000 л. для культивирования как суспендированных, так и иммобилизованных на носителе клеточных культур. Масштабируемая линейка биореакторов одноразового использования с механическим перемешиванием, которая обеспечивает гибкость использования благодаря настраиваемому программному обеспечению, аппаратному оборудованию и одноразовым компонентам, используемым для культивирования как суспендированных, так и иммобилизованных на носителе клеточных культур.

• Фильтры с мембраной марок Millipore Express® SHC или SHR. для стерилизации методом фильтрации. Для стерилизующей фильтрации питательных сред обычно используют фильтры с мембраной марок Millipore Express, SHC или SHR. На основании имеющихся данных ресурс мембран SHC и SHR при фильтрации питательных сред составляет примерно 1500 л/м² при 20–25 psi. Префильтры Milligard^® и PolysepTM II, демонстрируют хорошую производительность для защиты стерилизующих фильтров и повышение их ресурса до более чем 5000 л/м² при давлении 20–25 psi. Мембраны Millipore Express^® HPF при необходимости можно использовать для предварительной фильтрации перед мембраной Millipore Express^® SHR. Комбинации других префильтров и мембран Durapore® показали хорошие результаты для сходных приложений.

• Установки для приготовления растворов Mobius® FlexReady, содержащую перистальтический насос необходимой производительности, держатели для фильтров и ниши и контейнеры для необходимых расходных материалов. Установка для промышленной фильтрации буферов и сред обеспечивает наилучшее сочетание одноразовых сборок (Flexware), инновационных разделительных устройств и готового к работе оборудования, специально разработанного для подготовки сред и буферов. Установка предварительно собрана и протестирована и легко интегрируется в любой процесс. Результат: более быстрое время выполнения работ, повышенная производительность и меньший риск загрязнения.

• Оборудование для осветления культуральной жидкости. Оборудование для осветления и держатели для глубинных фильтров

В формате суспензионного культивирования отделение клеток и клеточного дебриса от раствора, содержащего целевой продукт, осуществляется в три этапа одним из нижеприведенных способов, в зависимости от первого шага осветления.

1. Центрифугирование (не является оборудованием MERK)  Префильтрация (Картриджные фильтры Polysep™ II, Картриджные фильтры Polygard®-CN, Картриджные фильтры Polygard®-CR, Картриджные фильтры Clarigard). Финишная фильтрация (Durapore® 0,45 мкм или Durapore® 0,22 мкм)

2. Глубинная фильтрация (Millistak C, Polysep^TM II, Polygard^® CR и CN)  Финишная фильтрация (Durapore0,45 мкм or 0,22 мкм)

3. Фильтрация в тангенциальном потоке (Durapore^® 0,45 мкм или 0,65 мкм)  Финишная фильтрация (Durapore^® 0,45 мкм или 0,22 мкм)

Установка Mobius^® FlexReady для осветления 

​

Пилотный держатель кассет Millistak^®

^​

Промышленный трехуровневый держатель кассет Millistak^®

^​

^​

• Инкубация, хранение и транспортировка

В процессе производства вакцин есть несколько стадий инкубации растворов с перемешиваем и без: расщепление примесных ДНК, инактивация вируса и расщепление вируса (при необходимости). Все эти стадии требуют соответствующее емкостное оборудование, и мы предлагаем использовать на этих стадиях миксеры, контейнеры для хранения и транспортировки

• Емкостное оборудование - миксеры, контейнеры для хранения и транспортировки Mobius®.

• Расщепление ДНК

Согласно нормативным требованиям, содержание в 1 дозе лекарственного препарата остаточной ДНК не должно превышать 10 нг, при этом длина отдельных нуклеиновых кислот не должна превышать 100 пар оснований. Для ферментативного расщепления ДНК в процессе производства вакцин мы рекомендуем использовать рекомбинантный фермент Benzonase, обладающий высокой специфичностью к ДНК и РНК при отсутствии детектируемой протеолитической активности.

• Инактивакция вируса

Самым распространенным агентом для инактивации при производстве вакцин является Formalin^®. При инактивации формальдегидом происходит необратимое связывание первичных аминогрупп поверхностных белков расположенными рядом с азотсодержащими группами ДНК или белков. Данные сшивки могут осуществляться также с не вирусными белками; поэтому, во избежание обратимого связывания вирусного белка с загрязнением, требуется предварительная частичная очистка живого инфекционного вируса от примесей. Инактивация осуществляется, например, при 32°C в течение 24 часов при 0,1% концентрации Formalin^®.

• Хроматографическая очистка
• Стандартные процессы очистки вируса содержат 1-2 стадии препаративной хроматографии. Мы предлагаем хроматографические установки двух типов на выбор:
• Система с полностью одноразовой линией потока Mobius>Flex Ready XMO 1/2 (скорость потока 0,1 – 2,2 л/мин) или Mobius>Flex Ready XMO (скорость потока 1,6 – 10,0 л/мин)

и Mobius-Chrom-20-System,(4,0 – 20,0 л/мин).

• Система из нержавеющей стали CoPrime (скорость потока 3 – 20 л/мин)

• Хроматографические колонки необходимого объема для процессов линеек Vantage® (ᴓ 6..25 см), QuickScale® (ᴓ 7..63 см) и IsoPakTM (ᴓ 44..100 см).

• В процессе производства культуральных вакцин очистка инактивированного вируса от ДНК и остаточных клеточных белков осуществляется при помощи ионообменной хроматографии или гель-фильтрации. Ионообменная хроматография осуществляется обычно в проточном режиме из-за относительно большого размера частиц вируса. В некоторых случаях очистка ионообменной хроматографией следует после гель-фильтрации. Гель-фильтрация обычно используется для очистки от низкомолекулярных примесей и белков, однако добиться очистки от нуклеиновых кислот значительно сложнее. Для решения задач хроматографической очистки вакцин предлагаются Гель-фильтрационные и ионообменные сорбенты линеек Fractogel®, Eshmuno® и мембранный адсорбер Natrix® Q.

• Оборудование для ультрафильтрации / диафильтрации в тангенциальном потоке (TFF)

На стадии фильтрации в тангенциальном потоке (TFF) вирусные частицы концентрируются с целью уменьшения объема полупродуктов для дальнейшей очистки. УФ/ДФ применяется для удаления низкомолекулярных примесей и для замены буфера. Для решения задач объемного концентрирования при производстве вакцин подходят мембраны Pellicon^® 2 Biomax^® с пределом отсечения 100, 300 и 500 кДа c экраном типа C. Концентрирование обычно проводят при трансмембранном давлении (TMP) 10–15 psi, скорости потока 5–6 л/мин/м², и коэффициент концентрирования обычно составляет от 20х до 50х раз. Скорость потока обычно составляет 50 л/м²/ч. Стандартные процесс требует 2-3 стадии ультрафильтрации TFF. Мы предлагаем 2 TFF установки многоразового формата:

• ​Cogent M1 TFF: резервуар 10 л (минимальный рабочий объем – 300 мл), площадь кассет 0.1 – 1.14 м2, скорость потока 0.2 – 4.5 л/мин

• Cogent Pilot TFF (конфигурируется по ТЗ заказчика): объем резервуара 100л (минимальный объем 7 л), площадь кассет 0.5 – 5.0 м2, скорость потока 250 – 2500 л/ч;

или установки в формате одноразовой линии потока: Mobius® FlexReady TF-1: резервуар 10 л (минимальный рабочий объем – 500 мл), площадь кассет 0.1 – 0.5 м², скорость потока 0.4 – 4.0 л/мин; Mobius® FlexReady TF-2: резервуар 50 л (минимальный рабочий объем – 1350 мл), площадь кассет 0.5 – 2.5 м², скорость потока 2.0 – 18.0 л/мин.

• Стерилизующая фильтрация и розлив

Для финишной стерилизующей фильтрации продукта Millipore предлагает фильтры линейки Durapore® c PVDF-мембраной 0.22 мкм стерилизующего качества и низким уровнем сорбции и фильтры Millipak®, конструкция которых позволяет минимизировать удерживаемый объем, повышая выход дорогостоящего продукта.

Все эти фильтры могут быть установлены в сборные системы Mobius® одноразового использования для финишного розлива. Сборки, изготавливаемые под индивидуальные потребности процесса, имеют полный и всеобъемлющий список пре-квалифицированных компонентов, включающий трубки, фильтры, стерильные коннекторы, одноразовые насосы и иглы.