Наборы реагентов MERCK для вестерн-блоттинга, которые предварительно оптимизированы для синергетического действия, обеспечивая сильные специфические сигналы и низкий фон, что поможет вам быстро получить результаты. 

• Блокирующие реагенты
• Стрептавидин и конъюгаты вторичных антител
• Хемилюминесцентные субстраты для вестерн-блоттинга
• Хромогенные субстраты для вестерн-блоттинга
• Усилители сигнала
• Зачистка и повторное зондирование

БЛОКИРУЮЩИЕ РЕАГЕНТЫ

Блокирование несвязанных участков мембраны предотвращает неспецифическое связывание антител, что может привести к высокому фону. Традиционные блокаторы на основе молока, желатина и других белков эффективны для многих применений блоттинга, но могут снизить чувствительность или обнаружение, маскируя сигнал или мешая обнаружению конкретных белков-мишеней.

Реагенты для блочного шумоподавления Immobilon ^®   включают безбелковые, готовые к использованию буферы, оптимизированные для снижения фоновых уровней при использовании хемилюминесцентного, флуоресцентного или фосфопротеинового обнаружения.

Руководство по выбору блокирующих реагентов для вестерн-блоттинга

СТРЕПТАВИДИН И КОНЪЮГАТЫ ВТОРИЧНЫХ АНТИТЕЛ

Современные методы иммунодетекции основаны на ферментативном обнаружении с использованием стрептавидина или вторичных антител, ковалентно связанных с такими ферментами, как пероксидаза хрена (HRP) или щелочная фосфатаза (AP). Конъюгированный фермент катализирует деградацию специфических субстратов, что приводит к генерации сигнала. Для вестерн-блоттинга доступны различные конъюгаты стрептавидина, белка A, белка G и вторичных антител. Мы также предлагаем широкий выбор субстратов HRP и AP для хемилюминесцентного, хромогенного и хемифлуоресцентного обнаружения в вестерн-блоттинге.

ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНТНЫЕ СУБСТРАТЫ ДЛЯ ВЕСТЕРН-БЛОТТИРОВАНИЯ

Субстраты Immobilon ^® HRP для хемилюминесцентного обнаружения обеспечивают повышенную чувствительность для большего количества количественных блотов, сокращая затраты за счет уменьшения концентрации антител, используемых для обнаружения. Выбирайте из портфолио субстратов Immobilon® различной чувствительности в удобном, готовом к использованию или двухкомпонентном формате для оптимизации обнаружения для вашего приложения вестерн-блоттинга.

Хемилюминесцентные субстраты Immobilon ^® Classico, Crescendo  и Forte включают семейство предварительно смешанных, готовых к использованию реагентов для обнаружения на основе пероксидазы, предлагаемых в диапазоне чувствительности для обеспечения оптимального соотношения сигнала к фону во всем спектре концентраций целевых белков.

Пределы обнаружения:

• Иммобилон ^®  Классико: ~ 6 пг целевого белка
• Иммобилон ^®  Крещендо: ~ 1-3 пг целевого белка.
• Иммобилон ^®  Форте: ~ 400 фг целевого белка
   

Подложки Immobilon ^® Western HRP, Immobilon ^® ECL Ultra и Immobilon ^® UltraPlus Western обеспечивают исключительную чувствительность и длительный срок службы сигнала в стандартных двухкомпонентных форматах. Эти составы позволяют использовать более разбавленные растворы первичных антител для иммуноблоттингового обнаружения .

Пределы обнаружения:

• Субстрат Immobilon ^® Western HRP: ~ 400 фг целевого белка
• Субстрат Immobilon ^® ECL Ultra: низкий диапазон фемтограмм
• Immobilon ^® ECL UltraPlus Субстрат для вестерн-блоттинга HRP: низкий диапазон фемтограмм

Относительная чувствительность хемилюминесцентных субстратов Immobilon ^® HRP

Рисунок 1. Серию двукратных разведений лизата клеток A431 [12-110], начиная с 4 мкг белка, проводили на 10% гелях mPAGE ® [MP10W15] в буфере MOPS [MPM0PS] при 200 В в течение 25 минут. Белок переносили на мембрану Immobilon ® -P [IPVH00010] на 1 час в буфере для переноса mPAGE ® [MPTRB] с 10% этанолом. Иммунодетекцию белка HH3 (15 кДа) проводили с использованием кроличьих анти-HH3 [H0164] и козьих антикроличьих [AP132P] антител в перечисленных разведениях. Блоты инкубировали с указанными реагентами ECL в течение 5 минут и получали изображения при экспозиции в течение 30 с в системе Bio-Rad ® ChemiDoc.

В реагентах для обнаружения Cytiva™ Amersham™ ECL используется улучшенное обнаружение HRP на основе люминола, при этом доступны различные составы для удовлетворения различных потребностей вестерн-блоттинга.

• Реагенты Cytiva Amersham™ ECL для вестерн-блоттинга рекомендуются для подтверждающих применений вестерн-блоттинга.
• Реагент Cytiva Amersham™ ECL Prime Western для обнаружения блоттинга позволяет обнаруживать как высокие, так и низкие количества белков в одном блоте.
• Реагенты для вестерн-блоттинга Cytiva Amersham™ ECL Select обеспечивают высокую чувствительность даже при использовании разбавленных первичных и вторичных антител.
• Реагент Cytiva Amersham™ ECL Start для вестерн-блоттинга был разработан для хемилюминесцентного обнаружения белков со средней и высокой экспрессией.

ХРОМОГЕННЫЕ СУБСТРАТЫ ДЛЯ ВЕСТЕРН-БЛОТИРОВАНИЯ

Для хромогенного обнаружения используется фермент, конъюгированный с пероксидазой (например, HRP) или щелочной фосфатазой (AP), для катализа реакции, которая приводит к осаждению нерастворимого окрашенного осадка для обнаружения. Наши хромогенные субстраты для вестерн-блоттинга доступны в форме раствора, порошка и таблеток, что обеспечивает гибкие возможности хранения и использования.

Таблетки SIGMA FAST ™ DAB  (хромогенный субстрат HRP) состоят из колориметрического осаждающего субстрата, который дает коричневый цвет при реакции с пероксидазой хрена и может растворяться в воде для приготовления готового к использованию забуференного раствора для блоттинг-детектирования.

BCIP/NBT (синий/фиолетовый) и BCIP/TNBT (синий/коричневый)  с одним реагентом  (хромогенные субстраты AP) являются высокочувствительными колориметрическими субстратами для щелочной фосфатазы.

TMB Enhanced One Component HRP Membrane Substrate  (хромогенный субстрат HRP) представляет собой однокомпонентный колориметрический субстрат, который дает темно-синий продукт.

УСИЛИТЕЛИ СИГНАЛА

Immobilon ^®  Signal Enhancer  предназначен для использования в вестерн-блоттинге, когда наблюдается низкая интенсивность сигнала. Усиление реакции антитело-антиген может привести к увеличению интенсивности сигнала от 2 до 10 раз. Immobilon ^®  Signal Enhancer совместим с мембранами из ПВДФ и нитроцеллюлозы и может использоваться с хромогенными, хемилюминесцентными и флуоресцентными методами обнаружения.

Набор SignalBoost™ Immunoreaction Enhancer Kit  предназначен для усиления хемилюминесцентного или колориметрического целевого сигнала на нитроцеллюлозных или ПВДФ-мембранах.

РЕАГЕНТЫ И НАБОРЫ ДЛЯ ЗАЧИСТКИ И ПОВТОРНОГО ЗОНДИРОВАНИЯ

Реагенты для удаления и повторного зондирования специально разработаны для быстрого и эффективного удаления антител из вестерн-блоттинга без существенного воздействия на иммобилизованные белки.

Реагенты ReBlot™ Plus эффективно удаляют с зондированных блотов связанные антитела. Реагенты ReBlot™ Plus доступны в мягких и сильных составах.

Со списком доступных реагентов и субтратов MERCK для имунодетекции можно ознакомится по ссылке...

Протокол вестерн-блоттинга (протокол иммуноблоттинга)​ подробнее...