Для изготовления полиакриламидных гелей. Совместимый с станцией УФ отверждения гелей mPAGE ® Lux.

Подходит для техник электрофореза, иммуноблоттинга, вестерн-блоттинга. Температура хранения 2-8°С.Набор предлагает быстрый и простой процесс отверждения геля для ручного литья мини-протеиновых гелей. Мини-гель затвердевает за 1,5 минуты, а общий процесс литья может занимать менее 3 минут. Набор поддерживает различные акриламидные гели в диапазоне 8,0–13,5%.

Гели и буферы для электрофореза белков

Электрофорез в полиакриламидном геле (ПААГ) - основополагающий метод, используемый для разделения белков и других макромолекул по их электрофоретической подвижности.

Полиакриламидные гели состоят из двух частей: накопительной части и рассасывающейся части. Укладочная часть геля представляет собой низкопроцентный акриламид, который служит для концентрации образцов в одну полосу перед попаданием в разделяющий гель. Рассасывающийся гель представляет собой акриламид с более высоким процентом содержания, который разделяет белки по размеру.

Полиакриламидные гели образуются путем полимеризации мономеров акриламида и сшивающих молекул бис-акриламида. Вместе акриламид и бис-акриламид образуют поры, через которые могут мигрировать белки. Концентрация акриламида линейно зависит от размера пор; более высокая концентрация акриламида приведет к уменьшению пор внутри геля.

Мелкие поры желательны для разделения низкомолекулярных белков.

Процент акриламида в геле влияет на разрешение белковых полос: более высокий процент акриламида полезен для разделения белков с низкой молекулярной массой, а более низкий процент акриламида полезен для разделения белков с более высокой молекулярной массой.

ПААГ гели можно отливать вручную или приобретать в виде готовых гелей.

Градиентные готовые гели охватывают более широкий диапазон размеров молекулярной массы.

Хотя готовые полиакриламидные гели можно приобрести для специализированных целей, например, для анализа белков разного размера по градиенту акриламида, многие исследователи предпочитают отливать свои собственные полиакриламидные гели вручную. Полиакриламидные гели, отлитые вручную, стоят дешевле по сравнению со сборными гелями; однако подготовка реагентов и оборудования для литья может быть утомительной и трудоемкой. Изменения в приготовлении гелевого буфера также могут привести к нестабильным характеристикам и качеству геля.

Химия полиакриламидного геля

В гелях PAGE используется прерывистая буферная система, в которой ион гелевого буфера отличается от текущего буферного иона. Разница в электрофоретической подвижности между этими двумя ионами образует движущийся градиент напряжения, через который проходят белки. Химия трис-глицинового геля является наиболее часто используемой системой PAGE, в которой используются гели, состоящие из трис-HCl, и рабочий буфер, состоящий из трис-основания и глицина. Гели трис-глицина работают в сильнощелочной среде, что может привести к нежелательным модификациям белков, таким как дезаминирование и алкилирование. В результате белковые полосы могут быть искажены или потерять разрешение в гелях трис-глицина.

Напротив, в гелях Bis-Tris используются Bis-Tris и HCl в гелевом буфере, а MOPS или MES в рабочем буфере. Гели Bis-Tris работают при нейтральном pH, что сводит к минимуму модификацию белка и способствует стабильности белка во время работы геля. Это приводит к более четкому разрешению и точности белковых полос. Гели Бис-Трис также имеют более длительный срок хранения, чем гели Трис-Глицин, которые со временем начинают гидролизоваться. Гели Bis-Tris можно комбинировать с рабочим буфером на основе MOPS или MES; разница в миграции между этими двумя ионами приводит к разным диапазонам разделения белков. MES следует использовать, когда интересующий белок небольшой (<50 кДа), тогда как MOPS следует использовать для разделения белков среднего и большого размера.

Также важно учитывать тип буфера для образцов, используемого при приготовлении белка.

В гелях трис-глицина буфер Лэммли обычно используется для денатурации и покрытия белков отрицательно заряженными ионами ДСН. Затем образцы кипятят при 100 °C, чтобы облегчить денатурацию. Нагревание буфера Леммли до 100 °C приводит к тому, что pH становится очень кислым, и было показано, что такое сочетание тепла и кислотности вызывает расщепление белка преимущественно по пептидным связям Asp-Pro (Rittenhouse and Marcus, 1984). Это приводит к появлению видимых продуктов деградации белка во время электрофореза.

И наоборот, в гелях Bis-Tris используется буфер для проб LDS, который поддерживает щелочной pH во время подготовки проб и не требует нагрева выше 70 ° C для полной денатурации белков. Этот препарат поддерживает целостность белка за счет минимизации расщепления пептидной связи Asp-Pro.

РАБОТАЮЩИЕ БУФЕРЫ ДЛЯ ГЕЛЕЙ БИС-ТРИС

Два буфера, которые можно использовать в качестве рабочих буферов для гелей SDS-PAGE: MES и MOPS. MES имеет более низкий pKa, чем MOPS, что обеспечивает более быстрое время работы. Буфер MES обеспечивает лучшее разделение белков с более низкой молекулярной массой, а буфер MOPS обеспечивает лучшее разделение белков с более высокой молекулярной массой. Буферные порошки MES и MOPS SDS доступны для быстрого и простого приготовления рабочего буфера для электрофореза в белковом геле.

ДРУГИЕ РЕАГЕНТЫ ДЛЯ ЗАЛИВКИ ГЕЛЕЙ ВРУЧНУЮ

Гели PAGE и SDS-PAGE можно отливать вручную с использованием акриламида/бисакриламида с TEMED и персульфатом аммония для полимеризации геля. Реагенты готовят, смешивают, затем заливают между двумя стеклянными пластинами для полимеризации. Акриламид и бисакриламид являются нейротоксинами в растворе, поэтому следует соблюдать осторожность, чтобы избежать прямого контакта. Для гелей для ручного литья доступны TEMED высокой чистоты, персульфат аммония, а также бисакриламид и акриламид в форме порошка или раствора.

Информация для заказа

MPMES Порошок рабочего буфера MES SDS для гелей mPAGE ^{® Bis-Tris} , упаковка по 5 шт. (Каждый пакет содержит 1 литр рабочего буфера)

MPM0PS MOPS SDS Порошок рабочего буфера MOPS SDS для гелей mPAGE ^{® Bis-Tris} , упаковка по 5 шт. (Каждый пакет содержит 1 литр рабочего буфера)

MPC0 Инструмент для работы с кассетами с гелем mPAGE ^®

MPTRB Порошок буфера для переноса для использования с гелями mPAGE ^{® Bis-Tris} , упаковка по 10 шт. (Каждый пакет содержит 1 литр буфера для переноса при 1X)

MPBD mPAGE ^® Буферная плотина

A3656 5-Aza-2′-deoxycytidine≥97%

T22500 N,N,N′,N′-TetramethylethylenediamineReagentPlus^®, 99%

43816 DL-Dithiothreitol solutionBioUltra, for molecular biology, ~1 M in H₂O

63689 2-MercaptoethanolBioUltra, for molecular biology, ≥99.0% (GC)

MPSTD4 mPAGE^® Color Protein Standard

MPSTD3 mPAGE^® Unstained Protein Standard

G1041 EZBlue^™ Gel Staining Reagent

SCT145 EZFluor^™ 1-step Fluorescent Protein Gel Stain (1L)

SCT147 EZFluor^™ UV 1-step Fluorescent Protein Gel Stain (1L)

PROTSIL1 ProteoSilver^™ Silver Stain Kit

Со списком совместимых с данным оборудованием наборов и реактивов MERCK можно ознакомится по ссылке...

Введение в SDS-PAGE — разделение белков по размеру (обзор техники, аксессуаров связанных материалов по ссылке...

Как использовать белковый гель mPAGE™ с помощью системы электрофореза мини-клеток Invitrogen XCell Surelock ^® (Рекомендации)

Как использовать белковый гель mPAGE™ с помощью системы электрофореза Bio-Rad (Рекомендации)

*Данный протокол применим к системам электрофореза Bio-Rad Mini-PROTEAN ^® Tetra, Mini-PROTEAN II ^® и Mini-PROTEAN ^® 3.

Материалы для скачивания

Оборудование MERCK для заливки гелей, гель-электрофореза и переноса (Листовка ЛФ)

РЕСУРСЫ ПО СОПУТСТВУЮЩИМ ПРОДУКТАМ

Статья: Как использовать белковый гель mPAGE ^® с помощью системы электрофореза Bio-Rad
Статья: Как использовать белковый гель mPAGE ^® с помощью  системы мини-клеточного электрофореза Invitrogen XCell Surelock ^®
Протокол: Справочное руководство по блоттингу белков
Брошюра: Рабочий процесс вестерн-блоттинга
Статья: Протокол вестерн-блоттинга (протокол иммуноблоттинга)

Использование камер вертикального электрофореза mPAGE ® MINI GEL со сборными гелями

mPAGE ® Mini wet transfer system Система влажного электрофоретического переноса гелей